Auswirkungen von Cyclosporin A und Adalimumab auf die Expressionsprofile histaminerger System-assoziierter Gene und microRNAs, die diese Gene in HaCaT-Zellen regulieren

Frühere Studien haben die Rolle des histaminergen Systems bei der Pathogenese der Psoriasis nicht vollständig aufgeklärt. Diese Studie zielte darauf ab, die Auswirkungen von Adalimumab und Cyclosporin A auf die Expression histaminerger systembezogener Gene und miRNAs, die diese Gene regulieren, in bakteriellen Lipopolysaccharid A (LPS)-stimulierten menschlichen Keratinozyten (HaCaT)-Zellen zu bewerten. HaCaT-Zellen wurden mit 1 µg/ml LPS für 8 h behandelt, gefolgt von einer Behandlung mit 8 µg/ml Adalimumab oder 100 ng/ml Cyclosporin A für 2, 8 oder 24 h. Unbehandelte Zellen dienten als Kontrollen. Die Zellen wurden einer Ribonukleinsäure (RNA)-Extraktion und einem Mikroarray, einer quantitativen Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktion und Enzyme-linked Immunosorbent Assay-Analysen unterzogen. Die statistische Analyse wurde mit den Programmen Statistica 13.0 PL (StatSoft, Krakau, Polen) und Transcriptome Analysis Console (Affymetrix, Santa Clara, CA, USA) durchgeführt (p < 0,05). Die differentielle Expression der folgenden zwei miRNAs wurde in LPS-stimulierten Zellen nach Behandlung mit Cyclosporin A oder Adalimumab nicht beeinflusst: hsa-miR-583 (herunterregulierte Expression), beteiligt an der Regulation des Histaminrezeptors 1 - HRH1 (Überexpression); has-miR-1275 (herunterregulierte Expression), beteiligt an der Regulation des Histaminrezeptors 1 – HRH3 (Überexpression) und Solute-Trägerfamilie 22 Mitglied 3 – SLC23A2 (heruntergeregelter Ausdruck)). Adalimumab und Cyclosporin A modulierten das histaminerge System in HaCaT-Zellen in-vitro. Es sind jedoch weitere Studien erforderlich, um die zugrunde liegenden Mechanismen aufzuklären.Abkürzungen: (-) – herunterreguliert im Vergleich zur Kontrolle, (+) – Überexpression im Vergleich zur Kontrolle, ACTB – β-Aktin, ADA – Adenosindeaminase, ADCYAP1 – Adenylatcyclase-aktivierendes Polypeptid 1, BMP – knochenmorphogenetisches Protein, bp – Basenpaar, cAMP – zyklisches Adenosin-3′-5′-Monophosphat, CBX7 – Chromobox-Protein-Homolog 7, cDNA – doppelt -strängige komplementäre DNA, CSA – Cyclosporin A DAG – Diacylglycerol, DIAPH – Diaphanous Related Formin 1, DNMT – DNA-Methyltransferasen, DRD2 – Dopaminrezeptor D2, EDN1 – Endothelin 1, EDNRA – Endothelinrezeptor Typ A, ELISA – Enzyme-linked Immunosorbent Assay , EZH2 – Enhancer of zeste homolog 2, FC – fold change, GABRB1 – Gamma-Aminobuttersäure (GABA) A-Rezeptor, Alpha 1, GABRB2 – Gamma-Aminobuttersäure (GABA) A-Rezeptor, Alpha 2, GABRB3 – Gamma-Aminobuttersäure (GABA) A-Rezeptor, Alpha 3, HaCaT – menschlicher Erwachsener, kalziumarme Hochtemperatur-Keratinozyten, HIS – menschliches Histamin, HLAs – menschliche Leukozyten-Antigene, HNMT – Histamin-N-Methyltransferase, HNMT – Histamin-N-Methyltransferase, HRH1 – Histaminrezeptor 1, HRH2 – Histaminrezeptor 2, HRH3 – Histaminrezeptor 3, HRH4 – Histaminrezeptor 4, HTR6 – 5-Hydroxytryptaminrezeptor 6, IGF1 – Insulinähnlicher Wachstumsfaktor 1, IL10 – Interleukin 10, IL12 – Interleukin 12, IL6 – Interleukin 6, IP3 – Inosit 1,4,5-Triphosphat, LPS – bakterielles Lipopolysaccharid A, LYN – LYN Proto-Onkogen, Tyrosinkinase der Src-Familie , MAPKs – mitogenaktivierte Proteinkinasen, miRNA – Mikro-RNA, MMP2 – Matrix-Metalloproteinase-2, NHDF – normale menschliche dermale Fibroblasten, NHEK – normale menschliche epidermale Keratinozyten, OCT3 – organischer Kationentransporter 3, PANTHER – Proteinanalyse durch Klassifizierung evolutionärer Beziehungen , PBS – phosphatgepufferte Kochsalzlösung, PI3K-AKT – Phosphatidylinositol-3-kinase-Proteinkinase B, PIP2 – Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphat, PMSF – Phenylmethylsulfonylfluorid, PSORS1- Psoriasis-Empfindlichkeitsgen 1, qRT-PCR – quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, RNA – Ribonukleinsäure, RNAi – RNA-Interferenz, RTqPCR – Real-Time Quantitative Reverse Transcription Reaction, SLC223A2 – Solute Carrier Family 22 Mitglied 3, SNX – Sortierung von Nexin, SOX9 – SRY-Box Transkriptionsfaktor 9, TGF-α – transformierender Wachstumsfaktor α, TGF-β – transformierender Wachstumsfaktor beta, TNF-α – Tumornekrosefaktor alpha, TP53 – Tumorprotein 5 z, VAMP2 – Vesikel-assoziiertes Membranprotein 2.